奶及奶粉中阿維菌素類藥物殘留量測定的整體解決方案— GB 31659.4-2022

阿維菌素類藥物是由阿維鏈霉菌產生的一類廣譜高效獸用抗寄生蟲藥，包括阿維菌素、伊維菌素、多拉菌素和乙酰氨基阿維菌素等。阿維菌素類藥物可對動物體外如疥螨、蜱蟲、跳蚤、線蟲等寄生蟲進行防治，降低寄生蟲感染帶來的負面影響。但隨著科學技術的發展，發現阿維菌素類藥物對多種生物類群均有毒副作用。根據GB 31650-2019要求，規定了阿維菌素不得在泌乳期使用，在牛奶中伊維菌素、多黏菌素和乙酰氨基阿維菌素三種藥物的殘留限_量要求依次為不高于10 μg/kg、15 μg/kg、20 μg/kg。

安譜實驗參照《GB 31659.4-2022 奶及奶粉中阿維菌素類藥物殘留量的測定 液相色譜-串聯質譜法》，采用CNWBOND HC-C18 SPE固相萃取柱凈化，對牛奶、奶粉兩種基質中阿維菌素類藥物殘留量進行測定，方法回收率高，精密度好。

一、樣品前處理

樣品提取

稱取牛奶2 g（準確至±0.05 g）或奶粉0.5 g（準確至±0.01 g）于50 mL 離心管中，加乙腈8 mL，渦旋后200 r/min 水平振蕩5 min，8000 r/min離心8 min，轉移上清液至另一50 mL離心管中，加水10 mL、三乙胺25 μL，混勻，備用。

SPE小柱操作：

固相萃取小柱：CNWBOND HC-C18 SPE，貨號SBEQ-CA0854 ，規格500 mg/6 mL；

活化：5 mL乙腈；

平衡：5 mL 淋洗溶液（30%乙腈水溶液，含0.02%三乙胺）；

上樣：全部備用液，速度每秒1滴；

淋洗：5 mL淋洗液，抽干，5 mL異辛烷淋洗，抽干；

洗脫：5 mL乙腈洗脫，洗脫后抽干；

濃縮：收集洗脫液，50℃水浴氮氣吹干，殘余物中加50%乙腈水溶液1.0 mL，渦旋1 min充分溶解，濾膜（有機相尼龍針式濾器，SCAA-104）過濾后供液相色譜串聯質譜測定。

基質匹配標準曲線

精密量取阿維菌素類藥物標準工作液適量，用50%乙腈水溶液稀釋阿維菌素、伊維菌素、多拉菌素和乙酰氨基阿維菌素濃度分別為0.5 ng/mL、1 ng/mL、2 ng/mL、5ng/mL、10ng/mL、20ng/mL，50ng/mL、100ng/mL和400ng/mL的系列標準工作液。各取標準工作液1.0 mL，分別加入空白試料經提取、凈化和吹干后的殘余物中，充分溶解，作為基質匹配標準溶液，過微孔濾膜（有機相尼龍針式濾器，SCAA-104）后上機測定。以特征離子質量色譜峰面積為縱坐標、基質匹配標準溶液濃度為橫坐標，繪制標準曲線。

二、儀器條件

2.1 液相色譜：

a) Athena C18-WP 液相色譜柱（2.1 mm*50 mm，1.8 μm，貨號：LAEQ-2105UA）；

b）柱溫：30℃

c）流速：0.40 mL/min

d）進樣量：10 µL；

f）流動相：A：含0.1%甲酸的乙腈溶液，B：含0.1%甲酸的水溶液；

表2-1 液相色譜梯度洗脫條件

2.2 質譜條件：

a) 液相色譜-質譜聯用儀；

b) 離子源：電噴霧離子源（ESI)；

c) 檢測方式：多反應監測（MRM)；

d) 掃描方式：正離子模式；

e) 離子源溫度：500℃；

f) 噴霧電壓：5500 V；

表2-2 待測目標化合物定性、定量離子對及電壓參考條件

三、實驗譜圖

四、實驗數據

五、實驗結論

外標法處理數據，牛奶和奶粉兩種基質中阿維菌素類藥物的標準曲線線性方程均線性良好，R2 > 0.995。在高、低水平下加標回收率均在70%—120%范圍內，滿足國標實驗要求。

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